| 基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列 |
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| 引用本文： | 申本昌,江红,乔传令.基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列[J].动物学杂志,2009,44(5):112-116. |
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| 作者姓名： | 申本昌 江红 乔传令 |
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| 作者单位： | 1. 广州医学院基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州,510182
2. 中国科学院动物研究所农业虫害与鼠害综合治理研究国家重点实验室,北京,100101 |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程领域前沿项目，国科金外资助字第30311120206号项目和国家高技术研究发展计划(863)项目，留学回国人员科研启动基金 |
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| 摘 要： | 利用4种产生平端切头的限制性内切酶消化小菜蛾(Plutella xylostella)的基因组DNA,然后利用DNA连接酶的催化作用,在4种不同平端切头的小菜蛾基因组DNA上连接一个氨基化的基因组步移衔接头序列,针对衔接头及已克隆的CYP9G2基因的序列,设计两对PCR上、下游引物,进行PCR扩增、T-A克隆和阳性克隆的巢式PCR验证,通过测序克隆到了小菜蛾CYP9G2基因上游未知序列约1.8 kb.通过对该基因的上游序列进行信息分析,发现1个可能的节肢动物动物转录起始子(Inr),3个CAAT样盒及1个抗氧化剂样反应因子,共5个可能的顺式调控元件.研究还表明,利用基因组步移方法可以快速地克隆已知序列的上游未知序列,实验操作经济、简便,对于已知cDNA序列或部分基因组序列的基因,其上游调控序列的克隆,基因组步移具有较高的实用价值.
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| 关 键 词： | 小菜蛾 顺式调控元件 基因组步移 聚合酶链反应 |
| 收稿时间： | 2008/11/26 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2009/6/26 0:00:00 |
Cloning of the Upstream Untranslated Region of CYP9G2 from Plutella xylostella by Genomic Walking |
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| SHEN Ben-Chang,JIANG Hong and QIAO Chuan-Ling.Cloning of the Upstream Untranslated Region of CYP9G2 from Plutella xylostella by Genomic Walking[J].Chinese Journal of Zoology,2009,44(5):112-116. |
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| Authors: | SHEN Ben-Chang JIANG Hong and QIAO Chuan-Ling |
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| Institution: | SHEN Ben-Chang JIANG Hong QIAO Chuan-Ling( Department of Medical Genetics , Cell Biology,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510182, State Key Laboratory of Integrated Management of Pest Insects , Rodents,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China) |
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| Abstract: | To clone the upstream untranslated region of CYP9G2 from diamondback moth,the genomic walking was performed according to the routine procedure based on PCR amplification using the outer adaptor primer(AP1) and CYP9G2 specific primer(GSP1).After T-A cloning,positive clones were confirmed by nested PCR using the outer adaptor primer(AP2) and CYP9G2 specific primer(GSP2) as forward and reverse primers.Analysis of the upstream DNA sequence of CYP9G2 showed that 5 cis-acting elements existed in the upstream sequ... |
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| Keywords: | CYP9G2 |
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