| 结核分枝杆菌H37Rv 色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 赵静静,徐胜凤,王虹军,沈洪波,王洪海. 结核分枝杆菌H37Rv 色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析[J]. 微生物与感染, 2008, 4(4): 195-199 |
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| 作者姓名： | 赵静静 徐胜凤 王虹军 沈洪波 王洪海 |
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| 作者单位： | 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的 克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析。方法 以结核分枝杆菌( 简称结核杆菌)H37Rv 基因组为模板, 扩增trpA 基因, 构建pET30a-trpA 重组质粒; 转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21( DE3) 诱导表达, 纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基( His-rMtTrpA) 。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE) 和质谱分析测定相对分子质量( Mr) 后, 用圆二色光谱( CD) 分析和同源模建方法检测二级和三级结构。研究不同浓度HisrMtTrpA对β亚基酶活反应的影响。结果 成功克隆了813 bp 的目的基因trpA, 并获得了高纯度的His-rMtTrpA 蛋白。重组蛋白Mr 为33. 151 ×103 ( 含载体蛋白) 。25 ℃时His-rMtTrpA 的二级结构包括31. 8% α 螺旋、31. 8% β 折叠、8. 4% β转角和27. 9%无规则卷曲, 它的三维模型显示为( β/ α) 8 桶状结构。酶学性质研究表明, 在His-rMtTrpA 与MtTrpB 的摩尔比为2. 2时, 色氨酸合成酶α亚基可以最大限度促进β亚基酶活反应。结论 成功得到高纯度的重组目的蛋白His-rMtTrpA, 其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础。
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| 关 键 词： | 色氨酸合成酶 α亚基 同源模建 |
Cloning, expression and enzymatic analysis of the recombinant tryptophan synthase a subunit from Mycobacterium tuberculosis H37Rv |
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| ZHAO Jing-jing,XU Sheng-feng,WANG Hong-jun,SHEN Hong-bo,WANG Hong-hai. Cloning, expression and enzymatic analysis of the recombinant tryptophan synthase a subunit from Mycobacterium tuberculosis H37Rv[J]. Journal of Microbes and Infection, 2008, 4(4): 195-199 |
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| Authors: | ZHAO Jing-jing XU Sheng-feng WANG Hong-jun SHEN Hong-bo WANG Hong-hai |
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| Affiliation: | ZHAO Jing-jing,XU Sheng-feng,WANG Hong-jun,SHEN Hong-bo,WANG Hong-hai(State Key Laboratory of Genetic Engineering,Institute of Genetics,School of Life Sciences,Fudan University,Shanghai 200433,China) |
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