鲈鱼IgM重链基因cDNA的克隆及其原核表达 |
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作者姓名: | 刘悦 张其中 崔淼 |
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作者单位: | 暨南大学水生生物学研究所, 热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心, 广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室, 广东 广州 510632 |
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基金项目: | 中央高校基本科研业务费专项资助基金(21612111);暨南大学引进优秀人才科研启动基金(50624065);暨南大学国家级大学生创新创业训练计划项目(1210559007) |
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摘 要: | 采用同源克隆和RACE技术扩增到鲈鱼 (Lateolabrax japonicus) 免疫球蛋白M (Immunoglobulin M,IgM) 重链 (Heavy chain,H) 基因全长cDNA序列。鲈鱼IgM cDNA全长为1 901 bp,开放阅读框包含1 749 bp,编码582个氨基酸。根据鲈鱼IgM和其他硬骨鱼免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸序列构建的系统发育树表明IgM、IgZ和IgD分别聚为一枝,其中IgM与IgZ分支的进化关系较近,而与IgD分支的进化关系较远。RT-PCR检测IgM在鲈鱼各组织器官的表达情况,其中在头肾及脾脏中表达量最高,心脏、肌肉及脑中几乎不表达。利用已获得的鲈鱼IgM cDNA序列,构建原核表达载体pQE30-IgM,并在M15大肠杆菌中成功诱导表达了分子量为63kD的重组蛋白His-IgM,Western-blotting显示鲈鱼IgM重组蛋白能与鼠源抗6×His的单克隆抗体特异性结合,说明已经获得了基因工程表达IgM重链蛋白。
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关 键 词: | 鲈鱼 免疫球蛋白M 克隆 组织分布 原核表达 |
收稿时间: | 2013-04-25 |
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