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抗肉毒毒素A人源单链抗体在酵母细胞中的分泌表达
引用本文:王慧,荫俊,侯晓军,邢洪光. 抗肉毒毒素A人源单链抗体在酵母细胞中的分泌表达[J]. 微生物学通报, 2005, 32(2): 50-53
作者姓名:王慧  荫俊  侯晓军  邢洪光
作者单位:军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
基金项目:国家重点基础研究973项目资助(No.2002CB513205).
摘    要:将特异肉毒抗毒素基因克隆入载体pPIC9k,G418抗性加压筛选阳性整合克隆,在毕赤酵母细胞GS115中进行分泌表达。获得了稳定分泌表达ScFv的工程菌,SDS—PAGE分析可见,目的蛋白分子量约为26kD,通过放大体积来探索重组抗毒素的诱导表达条件及纯化工艺,结果发现,1%甲醇诱导后72~84h,目的蛋白的表达达到高峰,占酵母培养上清中总蛋白的15%以上,经两步层析纯化,目的蛋白纯度可达95%。竞争活性测定结果表明,重组抗毒素在体外具有良好的活性,可竞争肉毒抗毒素马血清与毒素的特异结合。

关 键 词:人源单链抗体 分泌表达 纯化 毕赤酵母
文章编号:0253-2654(2005)02-0050-04
修稿时间:2004-07-05

High-level Secretion Expression of Human ScFv Against Botulinum Neurotoxin A in Pichia pastoris
WANG Hui,YIN Jun,HOU Xiao-Jun,XING Hong-Guang. High-level Secretion Expression of Human ScFv Against Botulinum Neurotoxin A in Pichia pastoris[J]. Microbiology China, 2005, 32(2): 50-53
Authors:WANG Hui  YIN Jun  HOU Xiao-Jun  XING Hong-Guang
Affiliation:WANG Hui ** YIN Jun HOU Xiao-Jun XING Hong-Guang
Abstract:
Keywords:Human ScFv  Secretion expression  Purification  Pichia pastoris  
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