腾冲嗜热厌氧杆菌6-磷酸-β-葡萄糖苷酶的表达与结晶及其功能鉴定

6-磷酸-β-葡萄糖苷酶 (PbgL，EC 3.2.1.86) 催化由磷酸烯醇式丙酮酸 糖磷酸转移酶系统(PEP-PTS)转运入胞内的某些磷酸化二糖水解．一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌 (Thermoanaerobacter tengcongensis) 编码PbgL (436个氨基酸残基) 的开放阅读框 (ORF TTE0337)被成功克隆，并在大肠杆菌BL21(Escherichia coliBL21)中有活性地表达．序列分析显示,该6-磷酸-β-葡萄糖苷酶属于糖基水解酶家族4(GH4)，与枯草杆菌(Bacillus subtilis)的LicH，海栖热袍菌(Thermotoga Maritima)的BglT的一致性分别为62%和40%．纯化后的重组PbgL(rPbgL)经SDS-PAGE分析，为1条分子量约50 kD的蛋白条带，与推测的分子量大小一致．该酶需要Mn²⁺、NAD⁺ 和 还原剂为辅因子，能专一性地水解pNPβG6P,并在85 ℃达到最高酶活性．Western免疫印迹实验,利用针对rPbgL的多克隆抗体血清，能从腾冲嗜热厌氧杆菌胞内检测到PbgL的表达．此外，rPbgL的蛋白晶体已被筛选获得，并收集到2.4Å分辨率的衍射数据．采用分子置换法的结构解析目前仍在进行中．