| 一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 李丹,黄非,夏梦芸,蒋彦,杨毅.一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达[J].微生物学报,2013,53(11):1240-1250. |
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| 作者姓名： | 李丹 黄非 夏梦芸 蒋彦 杨毅 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064;四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064;四川贝安迪生物基因工程有限公司，成都610064;四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064;四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064 |
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| 基金项目： | 国家“863 计划”(2012AA022204);四川省科技项目(2012GZ0003) |
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| 摘 要： | 摘要:【目的】从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株，寻找使用价值较高的碱性蛋白酶。【方法】通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株，经生理生化方法及16S rDNA 基因序列鉴定菌株;利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框;蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中进行重组表达;纯化活性蛋白酶后，利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力。【结果】分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌( Bacillus sp.)L010;蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基，编码382个氨基酸，氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽，77个氨基酸残基构成的前导肽，C端275个氨基酸残基组成的成熟肽;此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员，并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中重组表达时，在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶;SprD呈现出较高的催化活力，其反应最适条件为温度70℃，pH9－10。【结论】SprD在碱性(pH 7.0－ 10.0)、中高温(25℃－60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值。
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| 关 键 词： | 关键词:自加工，芽胞杆菌(Bacillus sp.) L010，大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)，表达，聚合酶链式反应，蛋白酶SprD |
| 收稿时间： | 2013/3/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 5/9/2013 12:00:00 AM |
Molecular cloning and expression of a novel mesophilicalkaline protease from Bacillus sp. L010 in Escherichia coli |
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| Dan Li,Fei Huang,Mengyun Xi,Yan Jiang and Yi Yang.Molecular cloning and expression of a novel mesophilicalkaline protease from Bacillus sp. L010 in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2013,53(11):1240-1250. |
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| Authors: | Dan Li Fei Huang Mengyun Xi Yan Jiang and Yi Yang |
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