应用TaqMan探针荧光定量PCR技术鉴定Lepr~(db/+)小鼠子代基因型

目的建立一种高效的应用Taq Man探针荧光定量PCR技术对Lepr~(db/+)小鼠子代基因分型的方法。方法提取228例Lepr~(db/+)小鼠子代鼠尾DNA,针对Lepr基因的突变位点(rs1801133)设计1对PCR引物和2条Taq Man探针。设定条件进行实时荧光PCR扩增,用SDS软件对SNP位点进行分型。通过2月龄动物的肥胖表现型验证并进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果用建立的Taq Man探针荧光定量PCR方法对228份样本进行检测,其中GG基因型64份,基因型频率为0.1929;GT基因型123份,基因型频率为0.5395;TT基因型41份基因型频率为0.2807。Taq Man探针荧光定量PCR方法分型结果与通过肥胖表现型分型结果比较,灵敏度为97.56%,特异度为99.47%。结论应用Taq Man探针荧光定量PCR技术可实现对Lepr~(db/+)小鼠子代基因位点的早期分型检测,方法简便,高效。