| 羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位 |
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| 引用本文： | 苏莉,俞赵荣,杨侃侃,王元红,钟灵毓,崔佣楸,张高峰,张谦,王勇,李永东.羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位[J].中国微生态学杂志,2018,30(10). |
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| 作者姓名： | 苏莉 俞赵荣 杨侃侃 王元红 钟灵毓 崔佣楸 张高峰 张谦 王勇 李永东 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学动物科技学院;宁波市疾病预防控制中心 |
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| 摘 要： | 目的克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析。方法根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增。将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024。将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况。纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析。将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59kDa。Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达。结论本实验为后续深入研究ORFV 024基因功能和致病机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 羊口疮病毒 024基因 表达 多克隆抗体 亚细胞定位 |
Expression, polyclonal antibody preparation and subcellular localization of orf 024 gene |
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