利用Tn51063转座诱变法分离苜蓿中华根瘤菌042BMnoeB基因的研究

采用三亲本杂交方法将带有Tn51063（含luxAB）的质粒pRL1063a导入苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM，进行转座子插入诱变，在含有氯霉素、卡那霉素的TY平板上筛选接合子。通过结瘤试验，从1000个突变株中，筛选到3个结瘤突变株042BMR5、042BMR11和 042BRM29。它们都表现出发光酶活性，表明转座子正向插入到基因组中的某个启动子下游。Southern杂交结果证实，转座子均为单一位点插入。对042BMR5突变株基因组进行反向PCR，扩增位于Tn51063两端的侧翼序列。测序结果表明，转座子插入到苜蓿中华根瘤菌的共生质粒pSymA noeB基因内。根据基因组中noeB上游和下游序列扩增出042BM noeB，其与苜蓿中华根瘤菌1021 noeB的同源性为98％，而与NoeB蛋白的氨基酸序列相似性为95％。疏水性分析发现，NoeB是一个跨膜蛋白，在N末端有4个跨膜区，其中包含3个初级螺旋和1个次级螺旋。