GL一7一ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位

本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp．130)染色体上克隆得到的6．8kb的GL－7－ACA酰化酶基因片段的限制酶谱，基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明，所克隆的片段上，不存在EcoR Ⅰ、HindⅢ、claⅠI切点，分别具有一个HpaⅠ、两个xhoⅠ、三个BamHⅠI以及四个Pst I切点，同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究，GL一7一AcA酰化酶基因已被定位在3．Okb的B 2－B3－Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYCl84、pDR540、pUCl9等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMRl0和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平，测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强，即pMRl0的产酶量比pMR9高一倍，而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMRll)，产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。