IFIT1负反馈上调干扰素β表达促进抗HSV-1病毒保护

Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）是危害人类健康的常见病原体之一，能够通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞并引起多种疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式识别受体，诱导干扰素β（IFN-β）的产生，通过表达干扰素刺激基因（ISG）发挥抗病毒功能。近年来，干扰素诱导的四肽重复蛋白1（IFIT1）在病毒感染过程中的作用引起了广大研究者的关注。然而，其具体机制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了小鼠成纤维细胞（L929）IFIT1敲除细胞株，免疫印迹方法检测敲除细胞株IFIT1在蛋白质水平的表达。转染HT-DNA和Poly［I:C］刺激L929 WT和IFIT1敲除细胞株，实时定量PCR技术检测发现，HT-DNA刺激敲除细胞时，IFN-β及下游ISGs的表达量显著升高。IFN-β的表达量比 L929-WT组平均高出13.4倍，IFIT1和趋化因子10（CXC chemokine ligand-10，CXCL10）的表达量比L929 WT组分别平均高出 6.7倍和21倍(P<0.001），而Poly［I:C］刺激无明显变化（P>0.05），表明IFIT1是通过DNA信号通路来行使其负反馈调节作用。为研究IFIT1基因的抗病毒作用，利用CRISPR/Cas9技术改造的HSV-1-VP26 mCherry 病毒感染该敲除细胞株，通过测定病毒荧光数及病毒拷贝数，发现IFIT1敲除细胞株与L929 WT细胞相比，存活率提高了60%（P<0.001），病毒增殖能力在48 h后降低28.6倍（P<0.001）。该结果表明，IFIT1基因的缺失有利于抵抗HSV-1的感染。综上所述，IFIT1通过DNA信号通路负反馈上调IFN-β及ISG的表达，IFIT1的缺失对病毒入侵发挥了保护作用。该结果为后续研究开发治疗HSV-1感染相关的治疗药物提供了一个新思路。