改良Trizol法提取血浆游离RNA

[目的]建立一种成本低、得率高的血浆游离RNA的提取方法。[方法]分别采用传统Trizol法、改良Trizol法、试剂盒法提取200μL健康成年人血浆中游离RNA,并比较三种方法所得RNA的浓度、纯度及大小片段RNA得率的差异。[结果]改良Trizol法所得RNA浓度是常规Trizol法的21. 7倍(P <0. 01),是试剂盒法的6. 4倍(P <0. 01);三种方法所得RNA纯度(A₂₆₀/A₂₈₀)无显著差异;采用RT-q PCR方法检测血浆游离RNA大小片段的回收率,外参秀丽线虫miR-39-3p(cel-miR-39-3p)代表小片段RNA,GAPDH代表大片段RNA,改良Trizol法检测Cq平均值分别为15. 64和33. 34,平均低于常规Trizol法2. 05～3. 62个Cq,低于试剂盒法0. 32～3. 34个Cq。[结论]改良Trizol法提取血浆游离RNA相较于常规Trizol法提高了10～20倍,增加了得率。