PRRSV NADC30-like SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法的建立与应用 |
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引用本文: | 项明源,廖倡宇,江地科,张鹏飞,王印,罗燕,杨泽晓,姚学萍.PRRSV NADC30-like SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法的建立与应用[J].生物技术通报,2020(5):80-85. |
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作者姓名: | 项明源 廖倡宇 江地科 张鹏飞 王印 罗燕 杨泽晓 姚学萍 |
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作者单位: | 四川农业大学动物医学院;动物疫病与人类健康四川省重点实验室 |
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基金项目: | 国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项(CARS-SVDIP)。 |
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摘 要: | 为建立高效快速的PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR(SYBR Green real-time PCR)检测方法,根据NADC30毒株Nsp2基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行灵敏度、特异性、重复性实验以及临床样品的检测。结果显示,标准品在10~7 copies/μL到10~2 copies/μL浓度范围内具有良好的线性关系,最低检测浓度为2.25×10~1 copies/μL;该方法与HP-PRRSV、PCV、PEDV、TGEV、PRV、CSFV、PoRV无交叉反应,批内和批间的变异系数(CV)小于1.9%,在临床样品的检测中较普通PCR有更高的检出率。建立了PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR检测方法,具有敏感性高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速等优点,可用于PRRSV NADC30-Like感染的早期诊断、样品的快速检测与定量分析。
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关 键 词: | PRRSV NADC30-Like 荧光定量PCR NSP2 定量分析 |
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