| 牛疱疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达 |
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| 引用本文： | 余晓岚,肖少波,方六荣,金梅林,陈焕春.牛疱疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达[J].中国病毒学,2003,18(2):159-163. |
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| 作者姓名： | 余晓岚 肖少波 方六荣 金梅林 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学畜牧兽医学院,湖北武汉,430070 |
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| 摘 要： | 以牛疱疹病毒I型 (BHV-I) 国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板,扩增出大小约0.77kb 的ul49基因完整编码区片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体中,获得含ul49基因的重组质粒pMD-VP22.采用双脱氧末端终止法进行序列测定,发现与国外Cooper株ul49基因序列完全一致,说明ul49基因相当保守.进一步将BHV-I ul49完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C1中,获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22.将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测发现在38kDa处有一条特异性的表达带.利用脂质体介导,将pEGFPVP22转染PK-15细胞,经G418加压筛选,获得稳定表达VP22的细胞克隆.在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞,发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中,而对照载体pEGFP- C1转染细胞的荧光分布于胞浆.
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| 关 键 词： | 牛疱疹病毒I型 ul49基因 克隆 序列分析 表达 |
| 文章编号： | 1003-5125(2003)02-0159-05 |
| 修稿时间： | 2002年9月9日 |
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