| 嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp. N16-5表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 刘文侠,李金山,高成华,薛燕芬,马延和. 嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp. N16-5表达载体的构建[J]. 微生物学报, 2014, 54(1): 89-96 |
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| 作者姓名： | 刘文侠 李金山 高成华 薛燕芬 马延和 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101 |
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| 基金项目： | 国家“973 项目”(2013CB733900);国家“863 计划”(2011AA02A206) |
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| 摘 要： | 【目的】构建可以在嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.N16-5中表达外源基因的表达载体。【方法】以枯草芽孢杆菌表达质粒pHCMC04为基本骨架,删除木糖诱导的启动子和木糖阻遏蛋白基因,分别插入枯草芽孢杆菌组成型强启动子P43和嗜碱芽孢杆菌N16-5的组成型启动子P EF,构建表达载体pABN165P43和pABN165P EF;将绿色荧光蛋白基因gfp作为报告基因连接至表达载体得到pABN165P43-gfp和pABN165P EF-gfp,利用原生质体转化法将其转化至Bacillus sp.N16-5,通过荧光显微镜和多功能荧光读板仪检测报告基因的表达情况。【结果】所构建的表达载体pABN165P43-gfp和pABN165P EF-gfp可以在Bacillus sp.N16-5中表达报告基因gfp,荧光定量数据显示,在7.5 h左右开始检测到绿色荧光蛋白的表达,从7.5 h到12 h荧光强度随时间增长迅速并在12 h左右达到最大,最大荧光值在7000左右。【结论】成功构建了2个嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.N16-5表达载体,实现了外源基因在嗜碱芽孢杆菌中的表达。
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| 关 键 词： | Bacillus sp. N- 表达载体 嗜碱芽孢杆菌 |
| 收稿时间： | 2013-05-05 |
| 修稿时间： | 2013-06-19 |
Construction of expression vectors for alkaliphilic Bacillus sp. N16-5 |
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| Wenxia Liu,Jinshan Li,Chenghua Gao,Yanfen Xue and Yanhe Ma. Construction of expression vectors for alkaliphilic Bacillus sp. N16-5[J]. Acta microbiologica Sinica, 2014, 54(1): 89-96 |
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| Authors: | Wenxia Liu Jinshan Li Chenghua Gao Yanfen Xue Yanhe Ma |
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| Affiliation: | Wenxia Liu;Jinshan Li;Chenghua Gao;Yanfen Xue;Yanhe Ma;State Key Laboratory of Microbial Sources and National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes,Institute of Microbiology,Chinese Academy of Sciences;University of Chinese Academy of Sciences; |
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