| 慢病毒介导的低表达RNF20肝癌稳转细胞系的构建及其生物学功能分析 |
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| 引用本文： | 崔雅妮,王艳峰,孙俊宁,段静静,任来峰,苏文.慢病毒介导的低表达RNF20肝癌稳转细胞系的构建及其生物学功能分析[J].中国细胞生物学学报,2020(2):177-185. |
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| 作者姓名： | 崔雅妮 王艳峰 孙俊宁 段静静 任来峰 苏文 |
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| 作者单位： | 山西医科大学第二临床医学院;山西医科大学附属肿瘤医院研究所 |
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| 基金项目： | 山西省研究生教育创新项目(批准号:2019SY259);山西省重点研发计划(社会发展)项目(批准号:201703D321013);山西省卫生健康委科研课题(批准号:2018063);山西省肿瘤医院研究所博士启动基金项目(批准号:201702);国家自然科学基金项目(批准号:81272696)资助的课题. |
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| 摘 要： | 该文探讨了环指蛋白(RNF20)缺陷对肝细胞肝癌的细胞增殖和迁移的影响,及其可能的作用机制。针对RNF20基因设计3组短发夹RNA序列(RNF20-shRNA1、RNF20-shRNA2和RNF20-shRNA3),通过构建pLent-U6-GFP-Puro-shRNF20慢病毒载体,包装慢病毒后感染人肝癌细胞SMMC-7721和Huh7,经嘌呤霉素抗性筛选建立RNF20敲低的肝细胞肝癌稳转细胞系。同时,设感染对照慢病毒pLV-shCtrl-EGFP的对照组(shCtrl-7721/shCtrl-Huh7)。实时荧光定量PCR检测RNF20 mRNA表达,荧光显微镜观察其绿色荧光蛋白表达,免疫荧光染色法和蛋白免疫印迹法检测RNF20、T-Akt及p-Akt蛋白的表达情况,BrdU掺入实验及CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,转录组测序分析基因转录水平。结果显示,RNF20-shRNA2对应肝癌细胞中的RNF20 mRNA表达最低,稳转细胞感染效率均高于85%,RNF20缺陷的SMMC-7721和Huh7较对照组细胞内RNF20、Wee1、p27、p53基因转录水平及RNF20蛋白表达水平明显降低,增殖与迁移能力明显增加,且p-Akt蛋白表达上调。Akt抑制剂派立福新处理的RNF20缺陷的肝癌细胞较未处理组增殖与迁移能力降低。实验结果提示,RNF20下调后促进肝癌细胞体外增殖与迁移,且其可能通过Akt通路进行调节。
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| 关 键 词： | RNF20 肝细胞肝癌 细胞增殖 细胞迁移 AKT |
The Construction and Functional Analysis of the Lentivirus Mediated Low Expression RNF20 Hepatocellular Carcinoma Cell Lines |
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| Authors: | CUI Yani WANG Yanfeng SUN Junning DUAN Jingjing REN Laifeng SU Wen |
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| Institution: | (The Second Clinical Medical College of Shanxi Medical University,Taiyuan 030013,China;Immunology Department,Shanxi Cancer Hospital and the Affiliated Cancer Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030013,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNF20 hepatocellular carcinoma cells proliferation migration Akt |
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