大鼠肝癌(BERH-2)细胞甲胎蛋白信使核糖核酸的分离与提纯 |
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引用本文: | 李明,徐露霞,李文裕.大鼠肝癌(BERH-2)细胞甲胎蛋白信使核糖核酸的分离与提纯[J].分子细胞生物学报,1981(2). |
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作者姓名: | 李明 徐露霞 李文裕 |
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作者单位: | 中国科学院上海细胞生物学研究所,中国科学院上海细胞生物学研究所,中国科学院上海细胞生物学研究所 |
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摘 要: | 采用双抗体免疫沉淀合成AFP的聚核糖体并合Poly(U)-Sepharose亲和层析的方法分离和提纯了大鼠肝癌BERH-2细胞的AFPmRNA。这种纯的AFPmRNA在2%聚丙烯酰胺—0.5%琼脂糖凝胶中以单一的22S带移动。用双抗体免疫沉淀的方法,鉴定麦胚抽提液中由AFPmRNA直接合成的蛋白。在纯甲胎抗体所沉淀的多肽中,有95%的放射性在凝胶电泳中与载体AFP一起移动。在最佳条件下,AFPmRNA在麦胚系统中翻译产物比AFPpRNA高54倍。用AMV反转录酶合成互补于AFP-mRNA的DNA(AFP~3H-cDNA),用分析AFP-mRNA.AFP~3H-cDNA杂化物的热变性来测定AFPcDNA的真实性。高达89℃的Tm值,表明所反转录的cDNA是AFP-mRNA真实的拷贝。
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