大肠杆菌等受体tRNALeu的T7 RNA聚合酶转录 |
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作者姓名: | 李勇 陈剑峰 王恩多 王应睐 |
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作者单位: | 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031 |
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基金项目: | 中国科学院基础研究项目 |
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摘 要: | 用化学方法合成编码2个大肠杆菌tRNALeu(tRNALeu1和tRNALeu2)的基因和T7启动子,分别克隆到pUC19载体上,并在纯化的T7 RNA聚合酶的体外转录系统中转录出不含修饰核苷酸的tRNALeu.在T7转录体系中,亚精胺对转录有负影响.在最适转录条件下,可以得到有活力的RNA转录物的量是模板DNA的250倍左右.在大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶的催化下,2种经体外转录产生的未修饰等受体tRNALeu(tRNALeu1和tRNALeu2)的亮氨酸接受能力基本相同,但只有从体内纯化对应的tRNALeu的四分之一左右,表明修饰核苷酸在tRNALeu氨酰化过程中起着较为重要但非关键的作用.
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关 键 词: | 等受体 T7 RNA聚合酶 体外转录 |
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