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制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号
引用本文:林世康,孙钵清,王琪炜,胡云龙,顾宁.制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号[J].中国细胞生物学学报,2018(7).
作者姓名:林世康  孙钵清  王琪炜  胡云龙  顾宁
作者单位:东南大学生物科学与医学工程学院;南京川博生物技术有限公司
摘    要:通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列(reverse-phase protein array,RPPA)的磷酸化抗体作为探针,建立LNCa P细胞中Akt、Erk/MAPK通路在4种方式(EGF、LY294、PMA、Na Cl)刺激下信号变化的细胞通路模型,利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号。结果获得4组细胞通路模型的RPPA测定数据及25个RPPA适用性的磷酸化抗体探针。4组模型结果均显示了通路中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹法(Western blot)分析结果一致,证实了分析数据的有效性与可靠性。结果表明,所制备磷酸化抗体探针与RPPA平台结合,极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针范围,使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。

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