南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化 |
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引用本文: | 高炳淼,潘坤,田建平,唐天乐,魏娜,张俊清.南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化[J].生物技术,2015(3):251-255. |
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作者姓名: | 高炳淼 潘坤 田建平 唐天乐 魏娜 张俊清 |
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作者单位: | 海南医学院药学院;海南省热带药用植物研究开发重点实验室;海南医学院热带医学与检验医学院 |
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基金项目: | 海南省自然科学基金项目(“益智遗传多样性的AFLP分析”,No.814291);海南医学院药学院大学生创新课题(“益智AFLP-PCR体系的建立与优化”,No.Hyydc2013004);海南医学院引进人才科研启动经费资助 |
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摘 要: | 目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。
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关 键 词: | 益智 AFLP-PCR 体系优化 引物筛选 |
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