| 中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 房婷,任军,张金龙,尹可欣,杨秀旭,于蕊,张晓鹏,于长明.中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析[J].生物工程学报,2016,32(1):95-104. |
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| 作者姓名： | 房婷 任军 张金龙 尹可欣 杨秀旭 于蕊 张晓鹏 于长明 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071,军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071 |
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| 基金项目： | 国家传染病重大专项 (No. 2013ZX10004001) 资助。 |
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| 摘 要： | 重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。
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| 关 键 词： | 鼠疫耶尔森菌，重组F1-V融合蛋白，发酵，分离纯化，免疫原性，亚单位疫苗 |
| 收稿时间： | 2/9/2015 12:00:00 AM |
Pilot-scale purification of rF1-V fusion protein of Yersinia pestis and characterization of its immunogenicity |
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| Ting Fang,Jun Ren,Jinlong Zhang,Kexin Yin,Xiuxu Yang,Rui Yu,Xiaopeng Zhang and Changming Yu.Pilot-scale purification of rF1-V fusion protein of Yersinia pestis and characterization of its immunogenicity[J].Chinese Journal of Biotechnology,2016,32(1):95-104. |
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| Authors: | Ting Fang Jun Ren Jinlong Zhang Kexin Yin Xiuxu Yang Rui Yu Xiaopeng Zhang and Changming Yu |
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| Institution: | Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China,Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China and Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Yersinia pestis recombinant F1-V fusion protein fermentation purification immunogenicity subunit vaccine |
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