| 利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究 |
| |
| 引用本文： | 王瑚,张璐,马旭,夏红飞. 利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究[J]. 中国细胞生物学学报, 2019, 0(2): 218-227 |
| |
| 作者姓名： | 王瑚 张璐 马旭 夏红飞 |
| |
| 作者单位： | 国家卫生计生委科学技术研究所遗传优生中心;北京协和医学院研究生院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(批准号:81771590)资助的课题~~ |
| |
| 摘 要： | 近年来, CRISPR/Cas9技术被迅速应用于生物学研究的各个领域。miRNA-125a已被证实与生殖密切相关,研究者在自然流产的患者中发现了异常的miRNA-125a。该研究利用CRISPR/Cas9技术在人绒毛膜滋养层细胞HTR8-S/Vneo中对miRNA-125a进行了定点编辑。对于定点敲除,我们首先在pX458表达载体的基础上额外引入一组启动子和sgRNA骨架序列用于片段敲除,此后分别设计用于单点敲除和片段敲除的sgRNA进行表达载体的构建,表达载体转染HTR8细胞后通过流式分选和T7EI酶切鉴定阳性单克隆;对于定点敲入,我们在体外构建供体载体,与CRISPR表达载体共转染HTR8细胞,通过流式分选和PCR鉴定阳性单克隆。DNA测序结果显示,敲除及敲入阳性单克隆细胞系在指定区域的碱基序列发生了改变; RT-qPCR结果显示,阳性单克隆细胞系中mi RNA-125a-5p和mi RNA-125a-3p的表达量较野生型也发生了相应变化;体外实验还显示, miRNA-125a有抑制HTR8-S/Vneo细胞系增殖及迁移的功能。研究证实, CRISPR/Cas9技术在细胞系中编辑mi RNAs是有效可行的,且对于miRNA-125a的定点敲除,片段敲除的效果要好于单点敲除。
|
| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 miRNA-125a 人绒毛膜滋养层细胞 片段敲除 定点敲入 |
Experimental Study on Gene Editing of miRNA-125a Using CRISPR/Cas9 System |
| |
| Wang Hu,Zhang Lu,Ma Xu,Xia Hongfei. Experimental Study on Gene Editing of miRNA-125a Using CRISPR/Cas9 System[J]. , 2019, 0(2): 218-227 |
| |
| Authors: | Wang Hu Zhang Lu Ma Xu Xia Hongfei |
| |
| Affiliation: | (Reproductive & Genetic Center of National Research Institute for Family Planning,Beijing 100081,China;Graduate School,Peking Union Medical College,Beijing 100730,China) |
| |
| Abstract: | Wang Hu;Zhang Lu;Ma Xu;Xia Hongfei(Reproductive & Genetic Center of National Research Institute for Family Planning,Beijing 100081,China;Graduate School,Peking Union Medical College,Beijing 100730,China) |
| |
| Keywords: | CRISPR/Cas9 miRNA-125a HTR8-S/Vneo fragment knock-out site-specific knock-in |
| 本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录！ |
|
