原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养* |
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引用本文: | 张钰付亮鲁超锁涛宋陆军.原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养*[J].现代生物医学进展,2014,14(6):1005-1008. |
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作者姓名: | 张钰付亮鲁超锁涛宋陆军 |
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作者单位: | (复旦大学附属中山医院普外科上海200032 |
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基金项目: | 上海市科学技术委员会基金项目(09ZR1405900) |
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摘 要: | 摘要目的:建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法:应用改良的Seglen 二步法原
位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置
显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果:每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量
平均为1.35× 106 / g体重,肝脏细胞存活率> 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m,肝脏细胞在接种
后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度> 95%。结
论:改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。
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关 键 词: | 肝脏细胞 原代细胞培养 分离 纯化 小鼠 |
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