原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养*

摘要目的：建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法：应用改良的Seglen 二步法原 位灌注和机械离心分离肝脏细胞，并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率，倒置 显微镜动态观察肝脏细胞形态变化，应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果：每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量 平均为1.35× 106 / g体重，肝脏细胞存活率＞ 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m，肝脏细胞在接种 后3 h基本完成贴壁；肝脏细胞接种后24h，所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin，肝细胞纯度＞ 95%。结 论：改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。