| hTEM8-N-RFP融合蛋白真核表达载体的构建及在HEK293F细胞中表达 |
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| 引用本文： | 张连成,高丽华,刘羽,郗永义,邵勇,贾康杰,胡显文,陈惠鹏.hTEM8-N-RFP融合蛋白真核表达载体的构建及在HEK293F细胞中表达[J].现代生物医学进展,2013,13(4):601-606. |
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| 作者姓名： | 张连成 高丽华 刘羽 郗永义 邵勇 贾康杰 胡显文 陈惠鹏 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院生物工程研究所 北京100071
2. 山西康宝生物制品股份有限公司 山西长治046011 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，"重大新药创制"国家科技重大专项 |
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| 摘 要： | 目的:构建人肿瘤内皮标志物8(hTEM8)胞外区(N端)与红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体并在HEK293F细胞中表达,为进一步研究hTEM8的相互作用蛋白及其在肿瘤血管形成过程中的机制奠定实验基础。方法:以质粒pDsRed-Express-C1和重组质粒pcDNA3.1(+)-hTEM8/Fc为模板,PCR扩增RFP和hTEM8-N基因片段,先后插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP,转染HEK293F细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白在转染细胞中的的表达,并用G418对转染的细胞进行加压筛选,Western blot检测hTEM8-N-RFP融合蛋白在转染细胞中的表达。结果:DNA测序、酶切鉴定的结果显示,表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP构建成功,且序列正确。转染后经荧光显微镜观察到HEK293F细胞中有红色荧光,经加压筛选单克隆后,在荧光显微镜下观察到稳定表达红色荧光的细胞株,Western blot检测到融合蛋白hTEM8-N-RFP在真核细胞HEK293F中获得表达。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达,为后期研究hTEM8的相互作用蛋白和其生理功能奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | 肿瘤内皮标志物8 红色荧光蛋白 真核表达 融合蛋白 |
Construction of Eukaryotic Expressing Vector of the Extracellular Domain of hTEM8 Fused to RFP and Its Expression in HEK293F Cells |
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