人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化 |
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引用本文: | 谢长林,芮斌,江娜,赵晨,唐雅珺,文汉.人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化[J].生物技术通报,2013(5):81-85. |
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作者姓名: | 谢长林 芮斌 江娜 赵晨 唐雅珺 文汉 |
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作者单位: | 安徽农业大学生命科学学院;中国科学技术大学生命科学学院 |
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摘 要: | 作为小GTP酶Arf6的鸟甘酸交换因子(GEF),人EFA6A蛋白主要包含PH和Sec7两个结构域,Sec7是行使GEF功能的核心区域。通过分析Jpred、Uniprot等生物信息学软件的预测结果,从全长1 024 aa中选取的重组Sec7结构域的边界为506-719,共214 aa。以人脑cDNA文库为模板,通过优化PCR程序成功扩增出Sec7基因,经NdeI和XhoI双酶切后亚克隆至原核表达载体p28a中,成功构建p28-Sec7重组子,测序结果与NCBI中公布的序列100%吻合。将重组质粒p28-Sec7转化至BL21-Gold(DE3)宿主菌中,终浓度0.3 mmol/L IPTG、16℃、24 h诱导表达,重组蛋白经过Ni柱和分子筛两步纯化。试验结果显示,重组Sec7成功表达,性质均一,纯度高于95%,表达量为70 mg/L。
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关 键 词: | Arf6 人EFA6A Sec7 表达 Ni-NTA柱 分子筛 |
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