| 利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性* |
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| 引用本文： | 孟令雪,孙新迪,张伟伟,郭旭,沈洋,邵淑丽.利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性*[J].中国应用生理学杂志,2022,38(4):322-325. |
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| 作者姓名： | 孟令雪 孙新迪 张伟伟 郭旭 沈洋 邵淑丽 |
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| 作者单位： | 1.齐齐哈尔大学生命科学与农林学院, 齐齐哈尔 161006;2.抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室, 齐齐哈尔 161006 |
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| 基金项目： | *齐齐哈尔大学黑龙江省教育厅基本业务专项重点项目(135109104); 黑龙江省高教强省优势特色学科——玉米“粮头食尾”重点专项(LTSW201737); 黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(植物性食品加工技术特色学科专项YSTSXK201809); 2020年齐齐哈尔大学研究生创新科研项目(YJSCX2020046) |
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| 摘 要： | 目的: 采用CRISPRi技术沉默人肺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达,观察细胞对顺铂敏感性的变化。方法: 采用生物信息学软件分析MRP1启动子序列,设计合成3对sgRNA干扰片段,定向克隆到pSPgRNA载体中,构建靶向MRP1的干扰表达载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞。实验共分为5组,分别为A549/DDP细胞组,Scrambled组,sgRNA-MRP1-1组,sgRNA-MRP1-2组和sgRNA-MRP1-3组,每组设置3个复孔,处理48 h后进行后续实验。通过qRT-PCR和Western blot检测MRP1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞对药物的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态变化。结果: 成功构建了sgRNA-MRP1-1、sgRNA-MRP1-2和sgRNA-MRP1-3 3种干扰载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞后,均能显著降低细胞MRP1基因表达(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好,MRP1 mRNA水平降低了72%,蛋白水平降低了53%。将sgRNA-MRP1-2转染细胞后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,IC50值由74.26±3.71降低至34.29±2.51,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化,产生凋亡小体。结论: 成功构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,均能有效沉默A549/DDP细胞中MRP1基因表达,可增强细胞对顺铂的敏感性。
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| 关 键 词： | CRISPRi A549/DDP细胞 多药耐药相关蛋白1 顺铂 细胞培养 |
| 收稿时间： | 2021-12-23 |
Silencing the MRP1 gene using CRISPRi technology to enhance the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin |
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| MENG Ling-xue,SUN Xin-di,ZHANG Wei-wei,GUO Xu,SHEN Yang,SHAO Shu-li.Silencing the MRP1 gene using CRISPRi technology to enhance the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin[J].Chinese Journal of Applied Physiology,2022,38(4):322-325. |
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| Authors: | MENG Ling-xue SUN Xin-di ZHANG Wei-wei GUO Xu SHEN Yang SHAO Shu-li |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPRi A549 / DDP cells MRP1 Cisplatin cell culture |
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