| 铜绿假单胞菌耐热亮氨酸氨肽酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及表达产物的酶学特性鉴定 |
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| 作者姓名： | 李进 李青云 刘幽燕 陆柳萃 白雪 唐爱星 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学化学化工学院;2. 广西生物炼制重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(21966007)；;广西自然科学基金项目(2018GXNSFAA281278)； |
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| 摘 要： | 氨肽酶在食品加工、饲料生产、生物活性肽制备等多个领域被广泛应用，尤其是耐热氨肽酶的应用前景更加广阔。目前，有关铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)耐热氨肽酶基因的成功克隆和表达的研究较少，本研究将源自铜绿假单胞菌GF31的亮氨酸氨肽酶基因aps进行密码子优化，通过全基因合成得到aps序列并构建周质表达载体pET22b(+)-pelB-aps,在大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta gami2(DE3)中进行表达。纯化后的重组菌所产亮氨酸氨肽酶比活力为6.8 U/mg,最适反应温度和pH值分别为80℃和8.0;在50℃～70℃或pH 7.0～9.0下孵育1 h后该酶仍保持80%以上的活力；Co2+对其酶活力有较强激活作用，Fe2+、 Ni2+、 Zn2+、 β-巯基乙醇、 DTT、 EDTA、 1,10-邻菲咯啉和Bestatin对其有较强的抑制作用；该酶对Leu-pNA和Met-pNA的水解效果较好，对Ala-pNA和Arg-pNA也有一定水解能力，其中...
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| 关 键 词： | 耐热亮氨酸氨肽酶 酶学性质 周质表达 铜绿假单胞菌 三维结构 |
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