重组逆转录病毒载体pLXPXSN—TCRα12-2-IRES-Vβ7．1的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究

目的：构建双表达逆转录病毒载体pLXPXSN—TCRα12—2-IRES—Vβ7．1，包装成病毒颗粒后有效地感染PBMC。方法：以实验室保存舍TCRVβ7．1基因和TCRα12．2基因的质粒为模板，分别扩增得到两个基因，亚克隆入载体pLXPXSN，得到重组质粒pLXPXSN—TCRα12—2．IRES—Vβ7．1。重组体质粒经酶切鉴定后，将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染PA317细胞，包装成完整的病毒后测定滴度，感染PBMC，用流式细胞仪和提取基因组DNA检测目的蛋白的表达。最后病毒感染PBMC，用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。然后用流式细胞术细胞凋亡率，MTT比色法检测pLXPXSN—TCRα12—2-IRES-Vβ7．1感染的PBMC对肝癌细胞BEL-7402和HEPG2的杀伤作用。结果：从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12．2和TCRVβ7．1，流式细胞仪检测表明目的基因可以在PBMC中有效的表达。pLXPXSN—TCRα12—2-IRES—Vβ7．1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和空载体感染组。结论：TCRα12．2和TCRVβ7．1能够整合进宿主PBMC的基因组中，并能得到有效地表达。pLXPXSN—TCRα12—2-IRES-Vβ7．1感染PBMC后可提高其对肝癌细胞的杀伤活性。