来源于大肠杆菌的NMN转移酶的克隆表达与酶学性质研究 |
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引用本文: | 段琳琳,李红梅.来源于大肠杆菌的NMN转移酶的克隆表达与酶学性质研究[J].工业微生物,2016(2):30-35. |
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作者姓名: | 段琳琳 李红梅 |
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作者单位: | 上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093 |
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摘 要: | 在生物体内,NMN(烟酰胺单核苷酸)转移酶能够催化NMN生成NAD.本研究通过构建重组表达质粒pET30α(+)-Nmnat,成功实现来源于大肠杆菌的NMN转移酶基因(Nmnat)的原核表达.从大肠杆菌基因组中克隆得到的NMN转移酶基因长度为1 245 bp,所编码的重组酶分子量45 kDa.对重组酶的酶学性质进行分析,结果显示该酶最适反应温度和pH分别为37℃和7.5.4℃下,该酶的热失活半衰期可长达990.2 min.Mn2+、Fe2对该酶的酶活的激活作用显著,而EDTA对酶活能造成明显的抑制作用.酶动力学分析结果显示,该酶对底物NMN催化的Km和Vmax分别为16.89 mmol/L和2.46 μmol/(L·min).该NMN转移酶基因在大肠杆菌宿主中的成功表达,为NAD生物合成应用研究奠定了基础.
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关 键 词: | 大肠杆菌 NMN转移酶 克隆表达 酶学性质 |
Cloning,expression and characterization of NMNadenylyltransferase from Escherichia coil |
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Abstract: | |
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Keywords: | Escherichia coli NMN adenylyltransferase cloning and expression enzymatic properties |
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