| CRISPR/Cas9敲除PLIN1基因增强3T3-L1脂肪细胞的脂解作用 |
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| 引用本文： | 冯晨毅,许祥,董维鹏,陈朝阳,燕炯.CRISPR/Cas9敲除PLIN1基因增强3T3-L1脂肪细胞的脂解作用[J].生物工程学报,2020,36(7):1386-1394. |
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| 作者姓名： | 冯晨毅 许祥 董维鹏 陈朝阳 燕炯 |
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| 作者单位： | 山西医科大学 公共卫生学院，山西 太原 030001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31772551)，山西省自然科学基金 (No. 201901D111182) 资助。 |
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| 摘 要： | 应用CRISPR/Cas9技术敲除3T3-L1前脂肪细胞plin1,观察PLIN1缺失对脂肪细胞中脂肪水解的影响并探究可能机制。常规培养3T3-L1前脂肪细胞,电穿孔法转染plin1敲除载体,嘌呤霉素培养基挑选plin1敲除细胞,观察转染及筛选后的细胞存活率。"鸡尾酒"法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,酶法测定甘油和TG含量,油红O染色观察脂滴形态及数目的变化。Western blotting检测PLIN1、PPARγ、Fsp27和脂肪酶的蛋白表达;RT-PCR检测PLIN1和脂肪酶的mRNA表达。对照组细胞诱导分化后,微小脂滴数目较少,单房脂滴数目较多并围绕细胞核呈环型排列。相较于对照组,敲除组细胞诱导分化后微小脂滴数目增加,单房脂滴体积缩小,数目减少;细胞中PLIN1mRNA及蛋白表达被显著抑制(P0.05);甘油水平显著上升(0.0984±0.0076),TG含量显著下降(0.031 0±0.005 3);HSL和ATGL两种脂肪酶的mRNA及蛋白表达均升高(P0.05);PPARγ和Fsp27的表达未有明显变化。上述结果表明plin1敲除后通过暴露脂滴中脂质以及上调脂肪酶等效应增强了3T3-L1脂肪细胞的脂解作用。
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| 关 键 词： | 脂滴，甘油三酯，脂肪酶，基因敲除 |
| 收稿时间： | 2019/11/21 0:00:00 |
CRISPR/Cas9 knockout plin1 enhances lipolysis in 3T3-L1 adipocytes |
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| Chenyi Feng,Xiang Xu,Weipeng Dong,Zhaoyang Chen,Jiong Yan.CRISPR/Cas9 knockout plin1 enhances lipolysis in 3T3-L1 adipocytes[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(7):1386-1394. |
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| Authors: | Chenyi Feng Xiang Xu Weipeng Dong Zhaoyang Chen Jiong Yan |
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| Institution: | School of Public Health, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lipid droplets triglyceride lipase gene knockout |
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