| 中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 刘淑清,郭春梅,侯志杰,颜栋,孙明忠,王立平,王小平,孙立新. 中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库的构建[J]. 动物学杂志, 2010, 45(5): 136-140 |
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| 作者姓名： | 刘淑清 郭春梅 侯志杰 颜栋 孙明忠 王立平 王小平 孙立新 |
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| 作者单位： | 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室,大连,116044;大连医科大学基础医学院,大连,116044;辽宁蛇岛老铁山自然保护区管理处,大连,116041 |
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| 基金项目： | 辽宁省自然科学基金,大连科技厅项目,辽宁省百千万人才工程项目 |
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| 摘 要： | 为研究中国蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis shedaoensis)基因工程产品,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术构建其毒腺的cDNA表达文库。采用RNAiso试剂提取毒腺总RNA,再采用Poly(A)PuristTM试剂盒分离纯化mRNA,第一链cDNA经反转录合成,双链cDNA经LD-PCR合成并扩增;分级分离去除小片段,收集大于400 bp的cDNA片段,与质粒载体pDNR-LIB连接,采用电转化法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞DH10B。构建的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库库容量为8×107cfu/ml,大多数插入片段大于1 000 bp,重组质粒表达率高(100%)。本研究成功构建了高质量的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库,表达文库质量高,可用于进一步克隆和表达中国蛇岛蝮蛇蛋白活性组分基因,并对其功能进行研究。
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| 关 键 词： | 蛇岛蝮 cDNA文库 SMART技术 PCR |
| 收稿时间： | 2009-10-10 |
| 修稿时间： | 2010-06-08 |
Construction of a cDNA Library from the Venom Gland of Chinese Gloydius shedaoensis shedaoensis |
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| LIU Shu-Qing,GUO Chun-Mei,HOU Zhi-Jie,YAN Dong,SUN Ming-Zhong,WANG Li-Ping,WANG Xiao-Ping and SUN Li-Xin. Construction of a cDNA Library from the Venom Gland of Chinese Gloydius shedaoensis shedaoensis[J]. Chinese Journal of Zoology, 2010, 45(5): 136-140 |
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| Authors: | LIU Shu-Qing GUO Chun-Mei HOU Zhi-Jie YAN Dong SUN Ming-Zhong WANG Li-Ping WANG Xiao-Ping SUN Li-Xin |
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| Affiliation: | LIU Shu-Qing GUO Chun-Mei HOU Zhi-Jie YAN Dong SUN Ming-Zhong WANG Li-Ping WANG Xiao-Ping SUN Li-Xin(Department of Biochemistry , Molecular Biology,Dalian Medical University,Dalian 116044,College of Basic Medicine,Administrative Division of the National Snake Isl, , Laotieshan Mountain Natural Conservation,Dalian 116041,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCR |
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