棉铃虫蜕皮调节转录因子在大肠杆菌中的重组表达及其包涵体纯化 |
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引用本文: | 赵小凡,蒋晓娟,徐筠娉,刘延荷,王金星.棉铃虫蜕皮调节转录因子在大肠杆菌中的重组表达及其包涵体纯化[J].昆虫学报,2004,47(3):281-286. |
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作者姓名: | 赵小凡 蒋晓娟 徐筠娉 刘延荷 王金星 |
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作者单位: | 山东大学生命科学学院,济南,250100 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目 (3 9870 0 95,3 0 0 80 0 0 2和 3 0 3 3 0 0 70 ),国家高技术研究发展计划“863”项目 (2 0 0 1AA2 14 0 3 1_1_2 ) |
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摘 要: | 蜕皮调节转录因子(hormone receptor 3,HR3)在昆虫蜕皮过程中启动蜕皮相关早期基因簇表达,并抑制蜕皮相关晚期基因簇表达,对昆虫蜕皮级联反应起着关键的调控作用。利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了棉铃虫 Helicoverpa armigera 蜕皮调节转录因子(HHR3),并与pGEX-4T-1载体连接,在大肠杆菌Escherichia coli DH5α内进行扩增,经过PCR筛选获得了HHR3-pGEX-4T-1重组质粒。 用该质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21并进行诱导表达,获得了与谷胱甘肽-S转移酶(GST)融合表达的HHR3包涵体,分子量在94 kD左右,通过无离子去垢剂CAPS(3-[cyclohexylamino]-1-propanesulfonic acid)变性、复性后获得了可溶性GST-HHR3融合蛋白,经凝血酶裂解和SDS-PAGE分离得到纯化的HHR3,经蛋白质N-端测序确认表达正确。用重组表达的HHR3免疫家兔,制备了兔抗HHR3多克隆抗体,免疫印迹检测显示该抗体对HHR3有特异性识别能力, 可以用于HHR3功能与调控等下游研究。免疫印迹检测结果还表明,HHR3在5龄向6龄蜕皮的幼虫脂肪体中高表达,在进入6龄24 h 的幼虫脂肪体中含量明显下降,在6 龄72 h 的幼虫中肠中没有检测到HHR3表达;成虫卵巢中有HHR3表达。
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关 键 词: | 棉铃虫 蜕皮调节转录因子 重组表达 包涵体纯化 抗体制备 |
文章编号: | 0454-6296(2004)03-0281-06 |
修稿时间: | 2003年10月30 |
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