| 鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立 |
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| 引用本文： | 林彦星,史卫军,曹琛福,黄超华,曾少灵,吴江,徐鹏,花群义.鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立[J].病毒学报,2021,37(5):1119-1127. |
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| 作者姓名： | 林彦星 史卫军 曹琛福 黄超华 曾少灵 吴江 徐鹏 花群义 |
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| 作者单位： | 深圳海关动植物检验检疫技术中心,深圳518045 |
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| 摘 要： | 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病.本研究根据ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因设计了 3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法.结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360-505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC-B646L、pUC-360-14L和pUC-CD2v的检出限分别为1.572×103拷贝/mL、1.934×103拷贝/mL 和 1.929×103拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2％;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1 215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1 192份样品为阴性,两种方法检测结果一致.本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360-505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义.
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒(ASFV) 基因缺失疫苗 荧光PCR 鉴别 检测 |
Establishment of A Triplex Real-time PCR Assay for Detection and Differentiation of Gene-deleted Vaccine Strains from Wild-type African Swine Fever Virus Strains |
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| LIN Yanxing,SHI Weijun,CAO Chenfu,HUANG Chaohua,ZENG Shaoling,WU Jiang,XU Peng,HUA Qunyi.Establishment of A Triplex Real-time PCR Assay for Detection and Differentiation of Gene-deleted Vaccine Strains from Wild-type African Swine Fever Virus Strains[J].Chinese Journal of Virology,2021,37(5):1119-1127. |
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| Authors: | LIN Yanxing SHI Weijun CAO Chenfu HUANG Chaohua ZENG Shaoling WU Jiang XU Peng HUA Qunyi |
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