| 十二种血清型蓝舌病病毒型特异性实时荧光定量RT-PCR定型方法的建立 |
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| 引用本文： | 李占鸿,杨振兴,宋子昂,李华春,李卓然,廖德芳,杨恒.十二种血清型蓝舌病病毒型特异性实时荧光定量RT-PCR定型方法的建立[J].病毒学报,2021,37(5):1158-1166. |
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| 作者姓名： | 李占鸿 杨振兴 宋子昂 李华春 李卓然 廖德芳 杨恒 |
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| 作者单位： | 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,昆明650224;云南农业大学,动物医学院,昆明650201 |
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| 摘 要： | 为建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)十二种血清型(血清6、8、10、11、13、14、17、18、19、20、22与23型)特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,根据GenBank公布的十二种BTV血清型毒株的基因节段2序列,选择高度保守区域,设计每种BTV血清型的扩增引物与TaqMan探针;以十二种血清型BTV参考毒株的cDNA为模板,进行引物的筛选,建立BTV血清型特异性qRT-PCR检测方法;对检测方法的灵敏度、特异性与重复性进行验证,分别以含有50、100与200个BTV噬斑形成单位(Plaque forming unit,PFU)的模拟BTV阳性血液样本为检测对象,进行检测效果的评估.实验结果表明,建立的BTV血清型特异性qRT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异性,对不同血清型BTV核酸拷贝数的检出下限在12拷贝/μL(BTV-8)至57拷贝/μL(BTV-14)之间;对我国反刍动物上广泛流行的流行性出血病病毒、中山病病毒与阿卡斑病毒核酸的检测结果均为阴性.反应具有良好的重复性,组内Ct值的变异系数在0.92％至1.96％之间,组间Ct值的变异系数在0.26％至1.62％之间.对模拟BTV阳性血液样本的检测结果显示,BTV血清型特异性qRT-PCR可有效检测含50个PFU(噬斑形成单位)的BTV血液样本.本研究建立的十二种BTV血清型特异性qRT-PCR定型方法具有特异性强、灵敏度高和耗时少等优点,可用于动物感染BTV血清型的诊断.
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| 关 键 词： | 蓝舌病病毒(BTV) 血清型 实时荧光定量RT-PCR 检测方法 |
Establishment of Serotype-specific Real-time qRT-PCR Method for 12 Serotypes of the Bluetongue Virus |
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| LI Zhanhong,YANG Zhenxing,SONG Ziang,LI Huachun,LI Zhuoran,LIAO Defang,YANG Heng.Establishment of Serotype-specific Real-time qRT-PCR Method for 12 Serotypes of the Bluetongue Virus[J].Chinese Journal of Virology,2021,37(5):1158-1166. |
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| Authors: | LI Zhanhong YANG Zhenxing SONG Ziang LI Huachun LI Zhuoran LIAO Defang YANG Heng |
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