Isolation of protoplasts from edible fungi

Summary Mycelium from the periphery of actively growing colonies on cellophane and from shake flask cultures was used for the isolation of protoplasts from strains ofAgaricus bisporus,Auricularia auricula, Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina andV. volvacea. The mycelial cells were treated with two mycolytic enzymes, Novozym 234 or lywallzyme. Protoplasts were produced from all the edible fungi tested.Pleurotus sajor-caju gave the highest yield (3.84×10⁷/ml), followed byAu. auricula (7.46×10⁶/ml),Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml) andV. volvacea (1.92×10⁶/ml), when treated with lywallzyme.Agaricus bisporus gave the smallest yield of protoplasts when Novozym 234 was used. The effects of different molarities of osmotic stabilizers were also studied. The cellophane method is simple and quick and can be used as a screening procedure. The yields of protoplasts obtained from liquid cultures were usually higher than those from cellophane cultures.

---

Aislamiento de protoplastos a partir de setas comestibles

Resumen Para el aislamiento de protoplastos de cepas deAgaricus bisporus, Auricularia auricula,Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina, y V. volvacea se utilizo micelio periferico de colonias que estaban en crecimiento activo en celofan y en frascos de agitación. Las celulas del micelio se tratarón con dos enzymas mycoliticos: Novozym 234 y lywallzyme. Todas las setas comestibles ensayadas produjerón protoplastos. Mediante tratamiento con lywallzyme la mejor cosecha de protoplastos la proporcionoP. sajor-caju (3.84×10⁷/ml) seguido porAu. auricula (7.46×10⁶/ml),Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml) yV. volvacea (1.92×10⁶/ml). Con Novozym 234Ag. bisporus fué la de menor rendimiento. También se estudiarón los efectos de distintos estabilizadores osmoticos a diferentes molaridades.

---

Isolement de protoplastes à partir de champignons comestibles

Résumé Du mycélium prélevé à la périphérie de colonies dévoloppées sur cellophane ou à partir de cultures liquides agitées a été utilizé pour la préparation de protoplastes d'Agaricusbisporus,Auricularia auricula, Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina etV. volvacea. Les cellules mycéliales ont été traitées par deux enzymes mycolytiques, Novozym 234 et lywallzyme. Par traitement avec le lywallzyme, des protoplastes ont été obtenus avec tous les champignons comestibles étudiés,P. sajor-caju donnant le rendement le plus élevé (3.84×10⁷/ml), suivi parAu. auricula (7.46×10⁶/ml,Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml etV. volvacea 1.92×10⁶/ml). Avec le Novozym 234,Ag. bisporus a donné le rendement en protoplastes le moins élevé. Les effets de différentes molarités de stabilisateurs osmotiques ont également été étudiés. La méthode de la cellophane est simple et rapide et peut être employée comme procédé de degrossissage. Les rendements en protoplastes obtenus à partir des cultures liquides sont habituellement plus élevés que ceux à partir des cultures sur cellophane.