工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2的遗传稳定性 |
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作者姓名: | 路金芝 杜志荣 赵庆 张琳 杨晶 陈伟京 蒋虹 李涛 王欣 王憬惺 卢圣栋 |
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作者单位: | [1]中国医学科学院基础医学研究所,北京100005 [2]中国医学科学院输血研究所,北京100005 [3]中国医学科学院实验动物研究所,北京100005 |
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基金项目: | 国家十一五重大新药创制候选药物研究 编号2009ZX09103 |
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摘 要: | 目的本基因工程大肠杆菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2所表达的靶向融合蛋白XE-TNFαm2已被初步证明具有用于清除艾滋病患者体内HIV病毒的前景。其目的蛋白表达水平为32%~36%细胞总蛋白。本研究旨在验证其遗传稳定性。方法工程菌株DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm分别在LBAmp+与LBAmp-二种固体培养基上逐日单菌落划线传代,32℃培养过夜。每间隔十代运用一般温控表达技术,确定其XE-TNFαm2的蛋白含量,最后比较分析各代之间目的蛋白(20.3 kDa)表达水平的差异情况。结果该重组基因工程菌连续传100代后XE-TNFαm2的蛋白表达水平没有明显差异(P〉0.05);只是在上述两种情况下传至100代后将其置于4℃保藏4、5、6个月,其目的蛋白表达水平有8%的下降。本载体质粒含有的CIts857序列、PL启动子与T1T2末端终止序列,是确保目的基因稳定高表达的3个关键元件。结论本研究结果证明该工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2具有良好的遗传稳定性。
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关 键 词: | 基因工程菌 靶向融合蛋白 传代 遗传稳定性 |
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