| 油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 武玉永, 谭秀华, 马立新.油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建[J].广西植物,2015,35(4):609-617. |
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| 作者姓名： | 武玉永 谭秀华 马立新 |
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| 作者单位： | 1. 滨州医学院 医学遗传学教研室, 山东 烟台 264003; 2. 湖北大学 生命科学学院 分子微生物学与基因工程实验室, 武汉 430062 |
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| 摘 要： | 根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列。先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18-T载体上,得到质粒pH BM714。再以质粒pHBM714 DNA为模板,用分别带有CpoI和Asc I酶切位点的引物进行PCR扩增,PCR产物在dTTP的保护下经T4 DNA聚合酶处理,与将质粒pHBM720DNA纯化后经CpoI和AscI双酶切后得到的大片段连接,连接产物转化大肠杆菌Xl_(10)-gold,得到正确的重组子命名为pHBM726。此质粒pH BM726,即为带有壮观霉素抗性基因(aadA)筛选标记的质体定位的乙酰辅酶A羧化酶基因油菜叶绿体单交换表达载体;在此载体中壮观霉素抗性基因(aadA)、乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因(ACC)和绿色荧光蛋白基因(gfp)共6个基因串联在一起,共用一个启动子序列,一起来进行表达;通过酶切检测、PCR验证和测序验证,均表明该表达载体构建成功。最后此载体在大肠杆菌中表达时,发现重组菌能够在含壮观霉素的培养基上生长,且在可见光下,能看到绿色荧光,表明壮观霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因均在大肠杆菌中成功表达;表达产物通过Western印迹验证表明组成乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因在大肠杆菌中成功表达。以上结果表明,该表达载体中串联排列的这6个基因均在大肠杆菌中成功表达。该研究结果可为质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转叶绿体的研究奠定基础,为油菜油脂代谢研究提供参考。
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| 关 键 词： | 油菜 叶绿体 乙酰辅酶A羧化酶 单交换 表达载体 构建 |
Costruction of single-cross expression vector for chloroplast acetyl coenzyme A carboxylase in Brassica napus |
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| WU Yu-Yong;,TAN Xiu-Hua;,MA Li-Xin.Costruction of single-cross expression vector for chloroplast acetyl coenzyme A carboxylase in Brassica napus[J].Guihaia,2015,35(4):609-617. |
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| Authors: | WU Yu-Yong; TAN Xiu-Hua; MA Li-Xin |
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| Institution: | 1. Department of Medical Genetics, Binzhou Medical University, Yantai 264003, China; 2. College of Life Sciences, Hubei University, Molecular Microbiology and Genetic Engineering Laboratory, Wuhan 430062, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Brassica napus chloroplast acetyl coenzyme A carboxylase single-cross expression vector construction |
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