| 滇龙胆GrWRKY5基因的克隆和植物表达载体构建 |
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| 引用本文： | 王彩云,李富生,李 涛,李彩霞,张晓东,王元忠.滇龙胆GrWRKY5基因的克隆和植物表达载体构建[J].广西植物,2015,35(5):741-747. |
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| 作者姓名： | 王彩云 李富生 李 涛 李彩霞 张晓东 王元忠 |
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| 作者单位： | 1. 云南农业大学 农学与生物技术学院, 昆明 650201; 2. 玉溪师范学院 资源环境学院, 云南 玉溪 653100; 3. 云南省
农业科学院 药用植物研究所, 昆明 650223; 4. 贵州省毕节市中药研究所, 贵州 毕节 551700 |
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| 摘 要： | WRKY蛋白是目前被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,在植物次生代谢物生物合成、植物生长和发育及衰老等生理过程以及生物、非生物防御反应中起重要的调控作用。该研究从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成的关键转录因子基因Gr WRKY5,并利用生物信息学方法对基因功能进行预测,构建植物过表达载体。结果表明:根据三年生滇龙胆转录组Gr WRKY5基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增Gr WRKY5 ORF序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建入门载体p ENTRTM2B-Gr WRKY5,经LR反应后构建植物过表达载体。Gr WRKY5 ORF全长591 bp,编码196个氨基酸,Gen Bank登录号为KF922375,其中第167与170之间的色氨酸(W)、精氨酸(R)、赖氨酸(K)、酪氨酸(Y)组成WRKY蛋白所特有的"WRKY"结构。序列分析表明Gr WRKY5是WRKY超家族的成员。经生物信息学在线软件分析发现,Gr WRKY5的等电点为6.29,脂肪族指数为61.37,不稳定指数为57.80。总平均疏水性为-0.708,为亲水蛋白;含有20种氨基酸,其中天冬氨酸(Asp)和脯氨酸(Pro)含量最高,为8.1%;半胱氨酸(Cys)含量最低,仅为1.0%。氨基酸序列系统发育分析表明,Gr WRKY5与拟南芥中WRKY家族中遗传距离最接近的是WRKY27,属于Ⅱe类成员;与Cr WRKY22和Vv WRKY22蛋白的亲缘关系较近;与Jc WRKY47和Tc WRKY27亲缘关系较远;BLASTp结果显示,Gr WRKY5与欧洲油菜Bn WRKY27-1的同源性最高(为69%);与拟南芥Aa WRKY22的一致性最低(仅为31%)。以Gateway入门载体p ENTR2B和目的载体p K2GW7为基础,成功构建了植物过表达载体p K2-35S-Gr WRKY5,该载体的成功构建为该基因在拟南芥、滇龙胆等植物中的遗传转化奠定了基础,同时为WRKY基因功能的深入研究提供依据。
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| 关 键 词： | 滇龙胆 GrWRKY5 基因克隆 序列分析 植物表达载体构建 |
Cloning and construction of plant expression vector of
GrWRKY5 gene in Gentiana rigescens |
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| WANG Cai-Yun,LI Fu-Sheng,LI Tao,LI Cai-Xi,ZHANG Xiao-Dong,WANG Yuan-Zhong.Cloning and construction of plant expression vector of
GrWRKY5 gene in Gentiana rigescens[J].Guihaia,2015,35(5):741-747. |
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| Authors: | WANG Cai-Yun LI Fu-Sheng LI Tao LI Cai-Xi ZHANG Xiao-Dong WANG Yuan-Zhong |
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| Institution: | 1. College of Agriculture and Biological Technology, Yunnan Agriculture University, Kunming 650201, China; 2. College of
Resources and Environment, Yuxi Normal University, Yuxi 653100, China; 3. Institute of Medicinal Plants, Yunnan Academy
of Agricultural Sciences, Kunming 650223, China; 4. Bijie Institute of Traditional Chinese Medicine, Bijie 551700, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gentiana rigescens GrWRKY5 gene cloning sequence analysis coustruction of plant expression vector |
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