| 金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法 |
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| 引用本文： | 相丽,姜毓君,刘伟,毕宇涵,赵凤,霍贵成. 金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法[J]. 微生物学报, 2008, 48(4): 526-531 |
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| 作者姓名： | 相丽 姜毓君 刘伟 毕宇涵 赵凤 霍贵成 |
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| 作者单位： | 东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划(2006BAD04A08-13); 中国博士后科学基金项目(20060400803); 黑龙江省科技攻关重大项目(GA06C101-08) |
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| 摘 要： | [目的]金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值.[方法]对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RTˉ,仅含DNA)样品进行Real-time PCR检测,根据经典(1 E)ˉ△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RTˉ样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RTˉ样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参.[结果]采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNA Ⅲ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p＞0.05).[结论]这种基于DNA扣除法的Real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析.
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| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌 Real-time RT PCR 相对定量 内参 DNA扣除法 黄色葡萄球菌 基因表达 扣除法 相对定量分析 Staphylococcus aureus gene expression quantification 定量方法 结果差异 比较 定量法 表达量 菌体生长 波动 变化 葡萄糖浓度 转录水平 培养基 情况 rRNA |
| 文章编号： | 0001-6209(2008)04-0526-06 |
| 收稿时间： | 2007-07-27 |
| 修稿时间： | 2007-07-27 |
Real-time RT PCR with DNA subtraction for relative quantification of gene expression in Staphylococcus aureus |
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| Li Xiang,Yujun Jiang,Wei Liu,Yuhan Bi,Feng Zhao and Guicheng Huo. Real-time RT PCR with DNA subtraction for relative quantification of gene expression in Staphylococcus aureus[J]. Acta microbiologica Sinica, 2008, 48(4): 526-531 |
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| Authors: | Li Xiang Yujun Jiang Wei Liu Yuhan Bi Feng Zhao Guicheng Huo |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Staphylococcus aureus real-time RT PCR gene expression internal standard DNA subtraction method |
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