| 携带小鼠白介素-4截短型突变体基因的5型腺相关病毒载体的构建及外源蛋白的体外表达 |
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| 引用本文： | 田丽春,朱情情,刘艾洁,王青青,黄光瑞. 携带小鼠白介素-4截短型突变体基因的5型腺相关病毒载体的构建及外源蛋白的体外表达[J]. 现代生物医学进展, 2019, 19(2): 211-216 |
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| 作者姓名： | 田丽春 朱情情 刘艾洁 王青青 黄光瑞 |
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| 作者单位： | 北京中医药大学东方医院;北京中医药大学生命科学学院;北京中医药大学中医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81300016，31500704） |
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| 摘 要： | 目的:制备携带碳端结构域缺失的小鼠白介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因突变体的5型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, r AAV)并在细胞水平检测其介导的外源蛋白表达情况。方法:通过分子克隆技术构建携带小鼠IL-4碳端22个氨基酸缺失的突变体的表达质粒pSNAV-mIL-4ΔC22,三质粒共转染法制备重组的5型AAV病毒,体外感染人支气管上皮样细胞系16HBE和BEAS-2B,并通过Western blot和ELISA检测外源蛋白表达。结果:DNA测序表明构建的小鼠IL-4碳端第118位氨基酸位点处截短的突变体基因表达序列正确无误,制备的重组病毒载体r AAV5-mIL-4ΔC22滴度约为3×10~(11)vg/m L。r AAV5-GFP感染16HBE和BEAS-2B细胞后36小时开始可见持续稳定的荧光蛋白表达,重组病毒r AAV5-mIL-4ΔC22感染16HBE和BEAS-2B细胞后外源蛋白在培养上清中呈分泌型表达。结论:本研究成功构建了携带小鼠IL-4碳端结构域缺失型突变体的AAV表达质粒并制备了重组病毒r AAV5-mIL-4ΔC22,该病毒可有效转染16HBE和BEAS-2B细胞并介导外源基因分泌表达截短型小鼠IL-4突变体蛋白。
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| 关 键 词： | 白介素-4；突变体；腺相关病毒；基因治疗 |
| 收稿时间： | 2018-06-28 |
| 修稿时间： | 2018-07-23 |
Construction of Recombinant Adeno-associated Virus Encoding Interleukin-4 Antagonistic Mutant and Exogenous Protein Expression in vitro |
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| TIAN Li-chun,ZHU Qing-qing,LIU Ai-jie,WANG Qing-qing and HUANG Guang-rui. Construction of Recombinant Adeno-associated Virus Encoding Interleukin-4 Antagonistic Mutant and Exogenous Protein Expression in vitro[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2019, 19(2): 211-216 |
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| Authors: | TIAN Li-chun ZHU Qing-qing LIU Ai-jie WANG Qing-qing HUANG Guang-rui |
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| Affiliation: | Dongfang Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 100078, China,School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 100029, China,School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 100029, China,School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 100029, China and School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 100029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Interleukin-4 Mutant AAV Gene therapy |
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