| MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制 |
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| 引用本文： | 解燕川,李文生,黄俏佳. MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制[J]. 国外医学:分子生物学分册, 2011, 0(6): 506-511 |
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| 作者姓名： | 解燕川 李文生 黄俏佳 |
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| 作者单位： | 福建医科大学福总临床医学院（南京军区福州总医院）分子医学研究中心,福州市350025 |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金（No.2009J01181）,南京军区医药卫生科研基金（No.08MA100） |
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| 摘 要： | 目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒载体 基因表达与调控 MEK5基因 |
Construction of MEK5 siRNA Recombinant Adenovirus Vector and Its Inhibitory Effect on MEK5 Expression |
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| XIE Yanchuan,LI Wensheng,HUANG Qiaojia. Construction of MEK5 siRNA Recombinant Adenovirus Vector and Its Inhibitory Effect on MEK5 Expression[J]. , 2011, 0(6): 506-511 |
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| Authors: | XIE Yanchuan LI Wensheng HUANG Qiaojia |
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| Affiliation: | Fuzhou Clinical College of Fujian Medical University (Fuzhou General Hospital ), Fuzhou, 350025, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenovirus vector gene expression and regulation MEK5 gene |
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