硫色曲霉β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的组成型分泌表达 |
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作者姓名: | 李松瑜 陈小玲 王军军 曹云鹤 董冰 |
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作者单位: | 中国农业大学,动物营养学国家重点实验室,北京,100193 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,教育部新世纪优秀人才支持计划,科技部农业科技成果转化资金项目 |
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摘 要: | 目的:构建硫色曲霉β-甘露聚糖酶的毕赤酵母组成型分泌表达菌株,研究重组菌株的产酶水平。方法:EcoR I/Xba I双酶切质粒pPIC-mann-opt,琼脂糖凝胶电泳、回收目的基因片段后,与组成型毕赤酵母表达载体pGAPzαA连接,转化大肠杆菌,经筛选获得含有pGAP-mann-opt的重组克隆;提取pGAP-mann-opt,用限制性内切酶BspH I线性化后,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,进行Zeocin抗性筛选和PCR鉴定。结果:获得了重组菌株,重组菌株在YPD培养基中摇瓶发酵24h,上清液酶活达到343U/mL,产酶蛋白约为1.0mg/mL。结论:构建的硫色曲霉β-甘露聚糖酶组成型表达菌株具有较好的应用前景。
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关 键 词: | β-甘露聚糖酶 毕赤酵母 组成型表达 |
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