| 实时荧光定量 PCR 检测皱纹盘鲍 Δ5 脂肪酸去饱和酶基因表达方法的建立及应用简 |
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| 引用本文： | 李明珠,麦康森,何艮,艾庆辉,徐玮,张文兵.实时荧光定量 PCR 检测皱纹盘鲍 Δ5 脂肪酸去饱和酶基因表达方法的建立及应用简[J].水生生物学报,2014,38(2):328-334. |
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| 作者姓名： | 李明珠 麦康森 何艮 艾庆辉 徐玮 张文兵 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室, 海水养殖教育部重点实验室, 青岛 266003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（编号：39670573）资助 |
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| 摘 要： | 研究以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)体内存在的2条Δ5 Fad(Hdhfad1和Hdhfad2)为目的基因,β-肌动蛋白(β-actin)和核糖体蛋白S9(Ribosomal protein S9,RPS9)为内参基因,应用2–ΔΔCt方法建立了实时荧光定量PCR(Real-Time quantitative PCR,RT-qPCR)检测体系,并应用此体系分析了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达差异。实验饲料含有不同的脂肪源,分别是棕榈酸甘油酯(Tripalmitin,TP饲料)、富含二十碳四烯酸(Arachidonic acid,ARA)的油脂(AO饲料)和富含二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)的油脂(EO饲料)。结果表明:针对Hdhfad1、Hdhfad2、β-actin和RPS9所设计的引物特异性强。各引物对的PCR扩增效率(Efficiency,E)分别为1.05、0.99、0.97和0.98,满足2–ΔΔCt方法对E的要求。当退火温度为52℃,反应体积为25μL时,RT-qPCR的扩增效果最好。所建立的体系能够准确定量Δ5 Fad的基因表达。利用该方法分析Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达结果显示,与TP对照组相比,EO和AO饲料显著降低了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad(Hdhfad1和Hdhfad2)的表达量。
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| 关 键 词： | 脂肪酸去饱和酶 鲍鱼 实时荧光定量PCR 基因表达 |
| 收稿时间： | 2013-01-29 |
ESTABLISHMENT AND APPLICATION OF REAL-TIME QUANTITATIVE PCR REACTION SYSTEM FOR STUDY IN GENE EXPRESSION OF Δ5 FATTY ACYL DESATURASE IN ABALONE (HALIOTIS DISCUS HANNAI INO) |
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| LI Ming-Zhu,MAI Kang-Sen,HE Gen,AI Qing-Hui,XU Wei,ZHANG Wen-Bing.ESTABLISHMENT AND APPLICATION OF REAL-TIME QUANTITATIVE PCR REACTION SYSTEM FOR STUDY IN GENE EXPRESSION OF Δ5 FATTY ACYL DESATURASE IN ABALONE (HALIOTIS DISCUS HANNAI INO)[J].Acta Hydrobiologica Sinica,2014,38(2):328-334. |
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| Authors: | LI Ming-Zhu MAI Kang-Sen HE Gen AI Qing-Hui XU Wei ZHANG Wen-Bing |
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| Institution: | Key Laboratory of Aquaculture Nutrition and Feeds (Ministry of Agriculture), Key Laboratory of Mariculture (Ministry of Education), Ocean University of China, Qingdao 266003, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fatty acyl desaturase Abalone Real-Time quantitative PCR Gene expression |
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