| 利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体 |
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| 引用本文： | 彭静,王琼,程小玲,刘梦雯,王美,辛化伟.利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体[J].生物工程学报,2018,34(4):569-577. |
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| 作者姓名： | 彭静 王琼 程小玲 刘梦雯 王美 辛化伟 |
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| 作者单位： | 武汉科技大学生命科学与健康学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31371385) 资助。 |
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| 摘 要： | 本研究旨在人绒毛膜促性腺激素(hCG)的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体,简化单域抗体制备过程,提高多肽生化稳定性。利用单域抗体通用骨架(cAbBCII10),以hCG结合多肽取代互补决定区CDR1或CDR3,合成cAb BCII10嫁接抗体全基因序列并与sfGFP基因序列融合后,插入到带有His标签的原核表达载体pET30a(+)中,成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP与pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,得到高表达量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA亲和柱纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白。通过抗原抗体结合实验,发现hCG结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定区CDR1或CDR3后都有抗原结合活性,具有相似的抗体滴度,且嫁接到CDR3后的抗原结合活性比CDR1要高(2–3倍)。嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性,具有一定的热稳定性和较好的碱耐受性,同时,所接入的hCG结合片段对hCG具有较特异的结合活性,为进一步优化抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体提供了可靠的实验基础
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| 关 键 词： | hCG，单域抗体，嫁接抗体，CDR1，CDR3，融合蛋白，表达纯化 |
| 收稿时间： | 2017/9/21 0:00:00 |
Preparation of anti-hCG single domain antibody by antibody grafting technique using an antigen-binding peptide |
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| Jing Peng,Qiong Wang,Xiaoling Cheng,Mengwen Liu,Mei Wang and Huawei Xin.Preparation of anti-hCG single domain antibody by antibody grafting technique using an antigen-binding peptide[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(4):569-577. |
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| Authors: | Jing Peng Qiong Wang Xiaoling Cheng Mengwen Liu Mei Wang and Huawei Xin |
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| Institution: | College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China,College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China,College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China,College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China,College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China and College of Life Science and Health, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, Hubei, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hCG single domain antibody grafted antibody CDR1 CDR3 fusion protein expression and purification |
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