| 利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶 |
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| 引用本文： | 潘阳,吴丹,吴敬. 利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶[J]. 生物工程学报, 2018, 34(5): 712-721 |
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| 作者姓名： | 潘阳 吴丹 吴敬 |
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| 作者单位： | 江南大学食品科学与技术国家重点实验室;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家杰出青年基金 (No. 31425020)，江苏高校优秀科技创新团队项目 (吴敬)，江苏省自然科学基金 (No. BK20171261)，111计划 (No. 111-2-06) 资助。 |
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| 摘 要： | 巴斯德毕赤酵母是用途广泛的蛋白表达系统。目前用于毕赤酵母的质粒主要以整合型质粒为主,很少见到游离的质粒用于外源基因的表达。文中通过将来源于酵母自身的自主复制序列连接到酵母整合型表达载体pGAP中构成自主复制的游离型表达载体pGAPZαA-PARS,将该载体用于表达木聚糖酶基因。转化毕赤酵母后同传统的整合型表达菌株相比,以甘油为碳源时最高酶活达到343 U/mL,比整合型表达提高了45.9%。同时游离载体表达重组酶比活相对整合表达提高了81.2%。为了节约发酵成本,进一步研究了分别以甘油、葡萄糖、蔗糖、混合碳源(蔗糖︰甘油=1︰2)等不同碳源下游离型重组菌株的表达水平。发现甘油表达水平最高,蔗糖最低,但是以工业葡萄糖为碳源时产酶成本最低。由于pGAP载体不需要以甲醇为碳源,因而文中所构建的游离载体pGAPZαA-PARS极大促进了毕赤酵母在食品行业中的应用。同时,游离型载体可大幅度提高表达水平,为进一步研究提高GAP启动子的高效表达奠定了基础。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母，游离型载体，木聚糖酶，GAP启动子，蛋白质表达 |
| 收稿时间： | 2017-10-23 |
Improving the expression of recombinant xylanase in Pichia pastoris with episomal expression plasmid |
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| Yang Pan,Dan Wu and Jing Wu. Improving the expression of recombinant xylanase in Pichia pastoris with episomal expression plasmid[J]. Chinese journal of biotechnology, 2018, 34(5): 712-721 |
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| Authors: | Yang Pan Dan Wu Jing Wu |
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| Affiliation: | 1 State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 2 Key Laboratory of Industrial Biotechnology Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China,1 State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 2 Key Laboratory of Industrial Biotechnology Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China and 1 State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 2 Key Laboratory of Industrial Biotechnology Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris episomal vector xylanase GAP promoter protein expression |
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