| 定点突变提高土曲霉Aspergillus terreus脂肪酶的催化活性 |
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| 引用本文： | 张晓凤,喻晓蔚,徐岩. 定点突变提高土曲霉Aspergillus terreus脂肪酶的催化活性[J]. 生物工程学报, 2018, 34(7): 1091-1105 |
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| 作者姓名： | 张晓凤 喻晓蔚 徐岩 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31671799)，江苏省“六大人才高峰”项目 (No. NY-010)，江苏省“333工程”项目 (No. BRA2015316)，国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2012AA022207) 资助。 |
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| 摘 要： | 本研究旨在利用理性设计的方法来提高来源于土曲霉Aspergillus terreus的酸性脂肪酶ATL的催化活力。通过同源比对,选择脂肪酶盖子区域和底物结合口袋域中的位点进行定点突变,得到8种ATL的突变脂肪酶。结果发现,盖子区域突变酶ATLLid与底物结合口袋域突变酶ATLV218W的催化活性显著提高。ATLLid和ATLV218W对底物对硝基苯酚月桂酸酯p-nitrophenyl laurate(p-NPL)的催化活性最高,k_(cat)值较ATL分别提高了39.37倍和50.79倍,k_(cat)/K_m值较ATL分别提高了2.85倍和8.48倍。与ATL相比,ATLLid和ATLV218W的热稳定性略有下降,最适p H为5.0,p H 4.0–8.0具有较好的稳定性,说明突变未对ATL的嗜酸耐酸特性产生影响。通过同源建模模拟及分子对接技术分析底物p-NPL与酶分子间的相互作用,解析了ATLLid和ATLV218W催化活性提高的机理。
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| 关 键 词： | 土曲霉脂肪酶，毕赤酵母，同源建模，定点突变，催化活性，分子对接 |
| 收稿时间： | 2018-01-24 |
Improvement of catalytic activity of Aspergillus terreus lipase by site-directed mutagenesis |
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| Xiaofeng Zhang,Xiaowei Yu and Yan Xu. Improvement of catalytic activity of Aspergillus terreus lipase by site-directed mutagenesis[J]. Chinese journal of biotechnology, 2018, 34(7): 1091-1105 |
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| Authors: | Xiaofeng Zhang Xiaowei Yu Yan Xu |
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| Affiliation: | The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China,The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China and The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aspergillus terrus lipase Pichia pastoris homologous modeling site-directed mutagenesis catalytic activity molecular docking |
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