表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白基因工程菌株的构建

利用PCR技术，从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因、ST₁突变基因和LT_B基因，通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化，构建了含K88ac-ST₁-LT_B融合基因表达载体的重组菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5）。经酶切鉴定和DNA序列分析证实，构建的重组质粒pXKST3LT5中含有K88ac-ST₁-LT_B融合基因，且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测，重组菌株表达的K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够被ST₁单抗、LTB和K88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实，表达的融合蛋白已丧失天然ST₁肠毒素的活性。免疫实验结果表明，K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够诱发小白鼠产生抗体，该抗体具有中和天然ST₁肠毒素的毒性作用，表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪黄、白痢基因工程菌苗的候选菌株。