| 2,5-DKG还原酶Ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 李越,陈策实,尹光琳.2,5-DKG还原酶Ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达[J].微生物学通报,1999(4). |
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| 作者姓名： | 李越 陈策实 尹光琳 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生物工程研究中心!上海，200233，中国科学院上海生物工程研究中心!上海，200233，中国科学院上海生物工程研究中心!上海，200233 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金!39770021 |
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| 摘 要： | 参照文献上的2，5-二酮基-D-葡萄糖酸（简称2，5-DKG）还原酶II基因序列，合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点，抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体为模板进行PCR反应，克隆得到2，5-DKG还原酶II基因，酶切验证与预期的结果相符合。将此片段克隆到pGEM-T载体上保存．将2，5-DKG还原酶II基因用EcoRI和BamHI内切酶切下，连接到pBV220载体上，构建成表达载体。42℃诱导不能得到稳定的蛋白表达条带和酶活力，测序发现基因的3’末端的原PCR引物外少合了一个碱基，终止密码子发生移码突变而消失。此外在5’端的启始密码子ATG前有三个碱基与pBV220载体上的SD序列发生配对。据此，重新设计和合成了PCR引物，并用pBV220和pBL4载体构建了两个表达载体。42℃诱导表达均得到了稳定的表达条带和较高的酶活力．
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| 关 键 词： | 2，5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶Ⅱ基因 PCR 克隆 表达载体 SD序列 |
CLONING AND EXPRESSION OF 2,5-DIKETO-D-GLUCONATE (2,5-DKG)REDUCTASE GENE IN ESCHERICHIA COLI |
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| Li Yue, Chen Ceshi, Yin Guanglin.CLONING AND EXPRESSION OF 2,5-DIKETO-D-GLUCONATE (2,5-DKG)REDUCTASE GENE IN ESCHERICHIA COLI[J].Microbiology,1999(4). |
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| Authors: | Li Yue Chen Ceshi Yin Guanglin |
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