过表达调控基因rapG提高雷帕霉素的产量

雷帕霉素是具有很好的抗真菌、免疫抑制、抗肿瘤等活性的微生物次级代谢产物,可由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)发酵产生。由于传统诱变育种的菌株产量较低,不能满足工业生产的需求。为了找到突破传统育种瓶颈的技术方法。本研究通过建立该菌株的遗传操作体系、构建表达载体、建立发酵、提取和检测等的研究方法,对传统诱变菌株(S.hygroscopicus17-1)进行遗传改造。首先,以整合型载体pSET152为出发载体,构建了含有自身启动子的rapG调控基因表达载体,建立并优化了该菌株的遗传操作系统,通过大肠杆菌与链霉菌属间接合转移的方法成功将rapG整合至原菌株基因组上,获得了该基因的多拷贝菌株S.hygroscopicus17-Gp。采用高压液相色谱和质谱等方法,检测分析了S.hygroscopicus17-1与S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量。结果表明S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量比原菌株提高了约40%,这为后期进行相关机制和产量提高的理论与实践研究奠定了基础。