基于微孔板比色法的总糖含量测定方法的建立及应用

采用单因素试验和响应面优化法研究了微孔板法高通量检测总糖含量的方法,并进行了方法学考察,研究了不同离子、氨基酸和蛋白质等对该方法测定的影响。并以微生物多糖、枸杞多糖、可溶性淀粉和多种单糖为试受对象,与传统在比色管中的硫酸蒽酮比色法和苯酚硫酸比色法测定结果进行了比较。结果表明,反应体系总体积为230μL,其中150μL浓硫酸,30μL 5%苯酚水溶液,在85℃水浴20 min,在此条件下,在490 nm处的光吸收值与葡萄糖浓度呈线性相关,拟合线性回归方程相关系数R2为0.994 1,线性范围为10~100 nmol/well。该方法相对标准偏差为0.4%,加标回收率在102.7%~104.10%之间。精密度试验、稳定性试验和干扰性试验进一步说明此方法简便快捷、准确可靠、干扰性小,能应用于总糖含量的高效测定。